當前位置:首頁 > 技術文章

            技術文章

            ELISA技術測定單克隆抗體操作步驟
            點擊次數:1190 更新時間:2019-04-04

            ELISA技術測定儀器、原料和試劑

            儀器

            聚苯乙烯96孔酶標板、微量移液管、酶聯免疫閱讀儀、水浴鍋。

            原料

            單克隆抗體

            試劑

            . 抗原及酶標記抗體

            ①抗原:兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG,Code No.A0423);

            ②酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP,Code No.P0260);均為

            DAKO 公司產品,使用時按照說明書要求稀釋。

            4. 洗滌液(含0.05%Tween 20的PBS):LPBS 中加入Tween-20 500μL。

            5. 封閉液(含%牛血清白蛋白,0.%Tween 20的PBS):0mLPBS 中加入00mgBSA,0μLTween-20。

            6. 底物溶液

            ①緩沖液(0.mol/LpH6.0):稱Na2HPO4·2H2O2.2g,NaH2PO4·2H2O 6.84g,用蒸餾水溶解,定容至500mL。

            ② TMB 貯液:稱60mgTMB 溶于0mL 二甲基亞砜中,4℃避光保存。

            ③底物應用液:現用現配,磷酸鈉緩沖液0mL,TNB 貯液0μL。30%H2O2 5μL,混勻。

            7. 終止液:2mol/LH2SO4

            操作步驟

            ①抗原包被:兔抗人IgG 作為抗原,用包被液l:8000稀釋,00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板

            中。4℃放置過一夜。

            ②洗滌:次日傾去凹孔內的液體,洗滌液洗3次。

            ③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h。

            ④洗滌:用洗滌液洗3次。

            ⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另—塊板上用PBS 連續稀釋(按照:2或:0),00μL /孔加到已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS 或空白培養基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育~2h。

            ⑥洗滌:用洗滌液洗3次。

            ⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋,00μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育h。

            ⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。

            ⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液00μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。

            ⑩終止反應、比色:加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反應的zui大稀釋度為待測樣品的效價。

            儀器、原料和試劑

            儀器

            聚苯乙烯96孔酶標板、微量移液管、酶聯免疫閱讀儀、水浴鍋。

            原料

            單克隆抗體

            試劑

            . 抗原及酶標記抗體

            ①抗原:兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG,Code No.A0423);

            ②酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP,Code No.P0260);均為

            DAKO 公司產品,使用時按照說明書要求稀釋。

            4. 洗滌液(含0.05%Tween 20的PBS):LPBS 中加入Tween-20 500μL。

            5. 封閉液(含%牛血清白蛋白,0.%Tween 20的PBS):0mLPBS 中加入00mgBSA,0μLTween-20。

            6. 底物溶液

            ①緩沖液(0.mol/LpH6.0):稱Na2HPO4·2H2O2.2g,NaH2PO4·2H2O 6.84g,用蒸餾水溶解,定容至500mL。

            ② TMB 貯液:稱60mgTMB 溶于0mL 二甲基亞砜中,4℃避光保存。

            ③底物應用液:現用現配,磷酸鈉緩沖液0mL,TNB 貯液0μL。30%H2O2 5μL,混勻。

            7. 終止液:2mol/LH2SO4

            四、操作步驟

            ①抗原包被:兔抗人IgG 作為抗原,用包被液l:8000稀釋,00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板

            中。4℃放置過一夜。

            ②洗滌:次日傾去凹孔內的液體,洗滌液洗3次。

            ③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h。

            ④洗滌:用洗滌液洗3次。

            ⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另—塊板上用PBS 連續稀釋(按照:2或:0),00μL /孔加到已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS 或空白培養基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育~2h。

            ⑥洗滌:用洗滌液洗3次。

            ⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋,00μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育h。

            ⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。

            ⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液00μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。

            ⑩終止反應、比色:加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反應的zui大稀釋度為待測樣品的效價。

            分享到:

            加入收藏 | 返回列表 | 返回頂部

            ©2025上海谷研實業有限公司 版權所有  總訪問量:394654 Design By 環保在線 
            主營:補體片斷5aElisa試劑盒,花生四烯酸Elisa試劑盒,維生素DElisa試劑盒 GoogleSitemap   備案號:滬ICP備12048703號-8

            聯系人: 馬先生
            電話:
            021-39921927,021-39596320
            手機:
            15026555973
            點擊這里給我發消息
            點擊這里給我發消息
             

            環保在線

            推薦收藏該企業網站