人骨骼肌細(xì)胞提取物說明書

人骨骼肌細(xì)胞提取物【Human Shoulder Strap Bone: Normal Skeletal Muscle Cells Derivatives】
  人骨骼肌細(xì)胞提取物說明書人骨骼肌細(xì)胞提取物是從人原代骨骼肌細(xì)胞提取的，人原代骨骼肌細(xì)胞從正常人骨骼肌組織制備。正常人骨骼肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克?。?/span><2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

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注意事項(xiàng)：
. 接收到人骨骼肌細(xì)胞提取物說明書，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
人骨骼肌細(xì)胞提取物說明書對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

COX4I 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

4E-BP / EIF4EBP 抗體, 鼠單抗 FCM    50 µg

Piwil2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P   IF  ICC/IF    50 µg

Interferon alpha-B / IFNA8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

FBXL7 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

Contactin 3 / CNTN3 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

RPS3 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IF   IP  ICC/IF    50 µg

PAK 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

P4HB 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM    25 Test

IL-33 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

人骨骼肌細(xì)胞提取物說明書環(huán)芬尼英文名稱：Ring Finney分子式：364.43分子量： C23H24O4：2624-43-3

8-啉分子式：63.6英文名稱：8- chloride：6-33-6分子量： C9H6ClN

2--3-硝吡分子式：39.英文名稱：2- amino -3- nitro pyridine：424-75-9分子量： C5H5N3O2

鹽鹽英文名稱：Gabapentin hydrochloride分子式：207.7分子量： C9H8ClNO2：6042-96-3

派洛寧Y英文名稱：Luoning Y分子式：302.8分子量： C7H9N2OCl：92-32-0

二氫歐山芹當(dāng)歸酯英文名稱：Two European mountain Qin ANGELOYL hydrogen alcohol分子式：328.359分子量：C9H20O5：5058-3-9

3,8-二溴菲羅啉分子式：340.0英文名稱：3,8- - Phenanthroline：0025-2-0分子量： C2H8Br2N2

活性艷藍(lán)KN-R英文名稱：Reactive brilliant blue KN-R分子式：626.54分子量： C22H6N2Na2OS3：2580-78-

2,3-二氯溴分子式：225.9英文名稱：Two - 2,3- chloride：5696-77-4分子量： C6H3BrCl2

,3,5-三硫酚分子式：74.29英文名稱：,3,5- - three aminothiophenol：38004-59-0分子量： C6H6S3