人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)

注意事項(xiàng)：
. 接收到人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

公司向您人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)的詳細(xì)說明：了解更多原代細(xì)胞提取物點(diǎn)擊進(jìn)

人心肌成纖維細(xì)胞提取物【Human Cardiac: Normal Cardiac Fibroblast Cell Derivatives】
     人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)人心肌成纖維細(xì)胞提取物是從人原代心肌成纖維細(xì)胞提取的，人原代心肌成纖維細(xì)胞從正常人心肌組織制備。正常人心肌成組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。?

I-TAC / CXCL 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

c-MET / HGFR 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

TXNDC7 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

FLRT 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

SerpinA6 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

NAALADL 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

CES3 / Carboxylesterase 3 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 µg

MSH6 / GTBP 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 µg

TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF0D 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)5-喹啉分子式：45.6英文名稱：5-, the alcohol：578-67-6分子量： C9H7NO

環(huán)戊英文名稱：Loop e分子式：68.2分子量： C5H8：42-29-0

甲環(huán)戊英文名稱：Methyl group分子式：82.4分子量： C6H0：693-89-0

L-丙氨叔丁酯鹽鹽英文名稱：L- alanine tert butyl ester hydrochloride分子式：8.66分子量： C7H5NO2·HCl：3404-22-3

番瀉苷D英文名稱：The D分子式：848.77分子量：C42H40O9：3727-7-3

酒石酸氫鉀分子式：88.8英文名稱：Potassium hydrogen：868-4-4分子量： C4H5KO6

2,3-雙(4-硝)-5-四氮唑氯水合物分子式：424.8英文名稱：2,3- - (4- nitrophenyl) -5- phenyl tetrazole chloride hydrate：6923-3-6分子量： C9H3ClN6O4·xH2O

4-羥嘧分子式：96.09英文名稱：4- hydroxy：5953-7-4分子量： C4H4N2O

鹽酸分子式：68.5英文名稱：Hydrazine hydrochloride：2644-70-4分子量： ClH5N2

疊氮磷酸二酯（DPPA）分子式：275.2英文名稱：Two phenyl phosphate (DPPA)：26386-88-9分子量： C2H0N3O3P； (C6H5

培養(yǎng)步驟：
人心肌成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。