小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物培養(yǎng)

小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物【Mouse Intestine: Normal Small Intestinal Mucosa Epithelial Cell Derivatives】
  小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物培養(yǎng)小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物是從小鼠小腸粘膜上皮細胞提取的，小鼠小腸粘膜上皮細胞從正常小鼠小腸粘膜組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證產品的質量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜

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注意事項：
. 接收到小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物培養(yǎng)，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物培養(yǎng)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

Galectin-3 / LGALS3 抗體, 兔單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

MAPD 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

RCAN 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

FOXA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

CD46 / MCAM 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

CD33 / Siglec-3 抗體 (PerCP), 鼠單抗 FCM    25 Test

SIGIRR / TIR8 抗體 (PE), 兔單抗 FCM    25 Test

SECTM 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg

JAM-A / FR 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

FAS / CD95 / APO- / TNFRSF6 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µL

小鼠小腸粘膜上皮細胞提取物培養(yǎng)Matrine 59-02-8  20mg

Tween-20 吐溫-20 00ml  瓶

無菌去離子水 For Cell Culture 500ml  瓶

Purine Nucleoside Phosphorylase 嘌呤核苷磷酸化酶 500U  瓶

伊紅染液 500ml  瓶

芬蘭彩色移液器 5-50ul  支

RNAwait(非凍型組織RNA保存液) 0ml  瓶

Pyruvic Acid 丙酮酸鈉 25g  瓶

人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制) 200ml  瓶

Liquid Sabourand Medium 液體沙氏培養(yǎng)基 250g  瓶

50ml親和層析柱 (2.5×6) 50ml  個