細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

BT-474 BT474 (人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞)

商品屬性

商品介紹

別稱 Bt-474; BT474

種屬 人類

年齡（性別） 女性，60歲

組織來源 乳腺導(dǎo)管癌

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

參考資料(來源文獻(xiàn))

生物安全等級(jí) 1

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10μg/ml Insulin＋2mM L-glutamine＋20% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時(shí)間 ~84-100小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in Amsterdam/IMR rats with regression in 10 days. Yes, in nude mice.

注意事項(xiàng) 1、BT-474細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞主要是成片生長； 2、匯合至80%即可傳代，細(xì)胞不會(huì)長太滿，5-6天傳代一次。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠原C(PGC)檢測試劑盒 ，英文名： PGC ELISA Kit

Mouse aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白5(AQP-5)檢測試劑盒

Mouseansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISAKit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhs-CRPELISAKit大鼠超敏C反應(yīng)蛋白

細(xì)胞NEK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitβOHB大鼠β

F7重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原

DUSP14重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

GPR56 Protein Human 重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白

CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原

GPR56 Protein Human 重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白

F7重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白

DUSP14重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

BT-474 BT474 (人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞)小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 大鼠結(jié)合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒

HumanC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-ⅠELISAKit 人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanChlamydiapneumoniaeaibody,Cpn-Ab檢測試劑盒人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米T14品系試劑盒20次

Humanselenoprotein1,SEP1ELISAKit人硒蛋白1(SEP1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T